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胰酶操作步驟： (*供參考) ：1. 吸取培養(yǎng)基,，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,，以除去殘余的血清,。2. 加入適量的胰蛋白酶消化液，略蓋過(guò)細(xì)胞即可,。根據(jù)細(xì)胞的特性可以增加或減少胰酶用量,，室溫放置30秒至2分鐘。（不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同）3. 顯微鏡下觀察,，細(xì)胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),。4. 此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液,。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。如果發(fā)現(xiàn)消化不足,，則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。 胰酶和胰蛋白酶不一樣,，前者包括后者,。貴州...

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒(méi)有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原,，形成胰蛋白酶,。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,，這種過(guò)程即自動(dòng)催化,。胰蛋白酶在小腸工作，它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽進(jìn)而分解為氨基酸,，其**適溫度約為 37°℃,。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成，不含 EDTA,，經(jīng)過(guò)濾除菌,。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化，或者一些組織的消化,，通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞,。該溶液濃度較高，可以稀釋到相應(yīng)濃度后使用,。胰酶用0.05%還是0.25%的,？需不需要含酚紅的？寧夏進(jìn)口胰酶價(jià)格信...

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,，下面匯總一下胰酶使用過(guò)程中常見(jiàn)的一些問(wèn)題,。胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液,。為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異,？商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸,，在運(yùn)輸過(guò)程中,，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移,。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過(guò)程中導(dǎo)致的PH值的變化很小,，PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右,，在PH值7.2-8.0的時(shí)候,，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色,。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引...

乙二胺四乙酸：（EDTA）是一種有機(jī)化合物,，常溫常壓下為白色粉末。它是一種能與Mg2+,、Ca2+,、Mn2+、Fe2+等二價(jià)金屬離子結(jié)合的螯合劑,。動(dòng)物細(xì)胞在粘附的時(shí)候,，需要有Ca或Mg離子的參與，EDTA與他們結(jié)合后,，導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞粘附能力降低,，再加上胰蛋白酶的消化作用，使得細(xì)胞與瓶壁快速脫離,。兩者起到了協(xié)同消化的作用,。難消化的細(xì)胞，胰酶中可填加EDTA,。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁,，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清,，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響,，那么可不離心,。如果消化液中含有胰酶和EDTA，好去除,。中國(guó)香港EDTA...

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎,？能，對(duì)于胰酶呈黃色的問(wèn)題,，不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn),。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請(qǐng)放心使用,。細(xì)胞消化時(shí),，胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響？細(xì)胞消化時(shí),，如果消化液中只有胰酶,，不含EDTA,，不去除是沒(méi)有問(wèn)題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA,，比較好去除,。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca,、Mg離子,，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和,，消化后要徹底清洗去除,，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,，所以常二者合用,。胰酶的保存0.25%胰酶細(xì)胞消化液(含有EDTA，含酚紅)消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),。新疆進(jìn)口胰酶報(bào)價(jià) 只斷裂賴氨酸...

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,，EDTA 等,。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞,。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性,、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),，在PH 8.0和37℃時(shí),，胰酶的作用能力**強(qiáng)，因此使用胰酶時(shí),，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷,。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾?..

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胰蛋白酶**點(diǎn)評(píng)胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀,，易于引流排痰,，加速創(chuàng)面愈合凈化，促進(jìn)肉芽**增生,，而不損傷正常**,，臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散,。不同的**或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣,。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),，在pH為,、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng),。使用胰酶時(shí),，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷,。因Ca2+、Mg2+和血清,、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液,。終止消化時(shí),，可用含有血清培養(yǎng)液或...

胰酶中的酚紅有哪些作用？酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為pH指示劑,，中性時(shí)為紅色,，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色,。研究表明：酚紅可以模擬固醇類***（特別是雌***）的作用,。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測(cè)，在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),，也會(huì)使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶,。圖 2. Phenol red test圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)8、在做細(xì)胞凋亡檢測(cè)時(shí),，細(xì)胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化,？Annexin V（膜聯(lián)蛋白）是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會(huì)螯合Ca2+從而影響Annexin V,，進(jìn)而影響結(jié)果,，因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化,，時(shí)間可以...

胰酶消化貼璧細(xì)胞原理胰酶是一種重要的消化酶,，它在人體消化過(guò)程中起到了關(guān)鍵作用。胰酶主要由胰腺分泌,，它能夠幫助人體消化食物中的蛋白質(zhì),、脂肪和碳水化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。而胰酶消化貼壁細(xì)胞則是指胰酶在消化過(guò)程中與腸道內(nèi)的貼壁細(xì)胞發(fā)生作用的機(jī)制,。胰酶消化貼壁細(xì)胞的原理主要包括胰酶的合成,、分泌和作用三個(gè)過(guò)程首先是胰酶的合成。胰酶是由胰腺內(nèi)的特殊細(xì)胞合成的,。這些細(xì)胞受到胃內(nèi)食物的刺激后,，通過(guò)胰腺神經(jīng)末梢的刺激而開(kāi)始合成和分泌胰酶。合成的胰酶經(jīng)過(guò)胰管進(jìn)入小腸,。接下來(lái)是胰酶的分泌,。胰酶的分泌主要通過(guò)胰腺分泌液的產(chǎn)生和排泄來(lái)實(shí)現(xiàn)。當(dāng)胃內(nèi)食物通過(guò)幽門(mén)進(jìn)入小腸后,，小腸壁上的細(xì)胞會(huì)分泌一種叫做胃腺素的物質(zhì),，這種物質(zhì)能...

胰酶消化液(TrypsinSolution)操作步驟(一)獲得目的基因1,、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。2,、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA***鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物,。(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體1、胰酶消化液(TrypsinSolution)載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段,。2,、PCR產(chǎn)物雙酶...

1,、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為什么要使用胰酶呢,？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶,，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈,，通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,，從而使兩者分離,。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形,。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2,、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過(guò)程,，這是什么原因,？血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制，就是用過(guò)量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì),。3、為什么使用了胰蛋白酶消化,，細(xì)胞還是成團(tuán)的,，這可能是什么原因?qū)е碌模竣傧瘯r(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過(guò)...

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶,，屬于絲氨酸蛋白酶家族,，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵,。胰蛋白酶可以從牛,、豬等哺乳動(dòng)物的胰臟提取，經(jīng)過(guò)純化后獲得結(jié)晶,，再制成凍干制劑,。牛的胰蛋白酶有223個(gè)氨基酸，分子量為23800道爾頓,，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶,。胰蛋白酶溶于水,，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機(jī)溶劑,。胰蛋白酶的等電點(diǎn)pH值為10.1,，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時(shí)不可逆失活,。鈣離子對(duì)胰蛋白酶的酶活具有保護(hù)和***作用,。[1]胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換...

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族,，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵,，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛,、豬等哺乳動(dòng)物的胰臟提取,，經(jīng)過(guò)純化后獲得結(jié)晶，再制成凍干制劑,。牛的胰蛋白酶有223個(gè)氨基酸,，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶,。胰蛋白酶溶于水,，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機(jī)溶劑,。胰蛋白酶的等電點(diǎn)pH值為10.1,，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時(shí)不可逆失活,。鈣離子對(duì)胰蛋白酶的酶活具有保護(hù)和***作用,。[1]胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。山東EDTA胰酶牌子 胰酶和雙...

胰蛋白酶：（Trypsin）為蛋白酶的一種,，是從牛,、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶,。由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽,，主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計(jì)算,，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位,。作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣,。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度,、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為,、溫度為37℃時(shí),，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng),。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間,，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。終止消化時(shí),，可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用,。有些細(xì)胞容易消化（如雞胚原代成纖維細(xì)胞）可用胰酶進(jìn)行消化，可以不加E...

對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過(guò)濾，分裝,，-20℃保存,，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊,，如果起沫，酶就變性了,。低溫,，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:...

1,、胰酶是,，就是說(shuō)PBS,注意，盡量不要用水來(lái)溶,，因?yàn)橐３譂B透壓,。2、EDTA的工作液溶度是－,，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整,。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加,。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁,，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清,，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響,，那么可不離心,。3,、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS,。4,、注意，血清可終止胰酶的作用,，但不能終止EDTA的作用,，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō)，終止消化后的離心是必要的,。5,、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將p...

胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么,？胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶,，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)體積會(huì)膨脹,，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性,。5、怎么才能判斷胰酶消化完全,？注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了,。一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了,，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了,，就應(yīng)該停止消化。6,、胰酶適用于哪些細(xì)胞消化,？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞,，如胚胎,、上皮、肝,、腎等組織,，但對(duì)纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值,、溫度,、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān),。胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞...

品名：0.25%胰蛋白酶溶液,，1X分類：細(xì)胞消化試劑規(guī)格：100ML用途：消化試劑，如胰蛋白酶,，被用于將粘附細(xì)胞從其附著的表面或底物上分離和降解,，以及將組織進(jìn)行游離,，以開(kāi)展原代細(xì)胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶（1：250）以及一種新型非哺乳動(dòng)物豬胰蛋白酶替代品,，稱為T(mén)hermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液,，可以快速消化，同時(shí)不損傷細(xì)胞,。其非哺乳動(dòng)物配方使它適用于無(wú)血清應(yīng)用,，不需要失效或?qū)γ敢种苿４嗽噭┛墒辜?xì)胞被快速分離,，形成單細(xì)胞懸浮物,，保持高細(xì)胞活力，并使傳代時(shí)的變異減至**小,。在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中...

①制備粗酶液稱取定量粗胰酶,，其胰蛋白酶活性為，胰淀粉酶活性為,，胰脂肪酶活性為,。將其用pH值為、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解,，然后進(jìn)行真空過(guò)濾,，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg,，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重,，放入干燥器中冷卻至室溫,。然后稱取，加入10L異辛烷,，在攪拌下使其形成均勻的分散液,，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h,，獲得濃度為,。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3...

①制備粗酶液稱取定量粗胰酶,，其胰蛋白酶活性為，胰淀粉酶活性為,，胰脂肪酶活性為,。將其用pH值為、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解,，然后進(jìn)行真空過(guò)濾,，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋,，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg，備用,。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重,，放入干燥器中冷卻至室溫。然后稱取,，加入10L異辛烷,，在攪拌下使其形成均勻的分散液，再加入定量蒸餾水,，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h,，獲得濃度為。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍,。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3...

細(xì)胞消化胰酶的配制對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過(guò)濾,，分裝，-20℃保存,，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫,，酶就變性了,。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中,，加入0.02g的EDTA(0...

1,、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為什么要使用胰酶呢,？胰酶的作用是什么,？胰酶是一種蛋白酶,，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過(guò)在特定位置上降解蛋白,，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,，從而使兩者分離。這時(shí),，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形,。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,，在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過(guò)程,，這是什么原因？血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制，就是用過(guò)量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì),。3、為什么使用了胰蛋白酶消化,，細(xì)胞還是成團(tuán)的,，這可能是什么原因?qū)е碌模竣傧瘯r(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過(guò)...

1,、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為什么要使用胰酶呢,？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶,，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈,，通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,，從而使兩者分離。這時(shí),，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形,。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,，在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過(guò)程,，這是什么原因？血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制,，就是用過(guò)量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì)。3,、為什么使用了胰蛋白酶消化,，細(xì)胞還是成團(tuán)的，這可能是什么原因?qū)е碌?？①消化時(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過(guò)...

胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度,、溫度和作用時(shí)間有關(guān),，在pH為8.0,、溫度為37°℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng),。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間,，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+,、Mg2+和血清,、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+,、Mg2+的BSS,，如:D-Hanks液。終止消化時(shí),，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用,。胰蛋白酶是一種胰絲氨酸肽鏈內(nèi)切酶，作用于多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè),。河南EDTA胰酶采購(gòu)胰蛋白酶（Trypsin）簡(jiǎn)稱胰酶,，是一...

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒(méi)有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原,，形成胰蛋白酶,。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,，這種過(guò)程即自動(dòng)催化,。胰蛋白酶在小腸工作，它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽進(jìn)而分解為氨基酸，其**適溫度約為 37°℃,。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成,，不含 EDTA，經(jīng)過(guò)濾除菌,。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,，或者一些組織的消化，通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞,。該溶液濃度較高,，可以稀釋到相應(yīng)濃度后使用。EDTA是乙二胺四乙酸,，一種金屬螯合劑,。進(jìn)口胰酶聯(lián)系方式 只斷裂...

①制備粗酶液稱取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為,，胰淀粉酶活性為,，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為,、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解,，然后進(jìn)行真空過(guò)濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋,，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg,，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重,，放入干燥器中冷卻至室溫,。然后稱取，加入10L異辛烷,，在攪拌下使其形成均勻的分散液,，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h,，獲得濃度為,。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3...

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎,？能，對(duì)于胰酶呈黃色的問(wèn)題,，不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,，請(qǐng)放心使用,。細(xì)胞消化時(shí)，胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響？細(xì)胞消化時(shí),，如果消化液中只有胰酶,，不含EDTA，不去除是沒(méi)有問(wèn)題的,。如果消化液中含有胰酶和EDTA,，比較好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑,，主要作用在于能螯合Ca,、Mg離子，使細(xì)胞分離,。但EDTA不能被血清中和,，消化后要徹底清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁,。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,，所以常二者合用。胰酶的保存消化液經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化,。寧夏國(guó)產(chǎn)胰酶介紹 0.25%胰酶是細(xì)...

1,、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么,？胰酶是一種蛋白酶,，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過(guò)在特定位置上降解蛋白,，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,，從而使兩者分離。這時(shí),，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形,。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,，在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過(guò)程,，這是什么原因？血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制,，就是用過(guò)量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì)。3,、為什么使用了胰蛋白酶消化,，細(xì)胞還是成團(tuán)的，這可能是什么原因?qū)е碌?？①消化時(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過(guò)...

乙二胺四乙酸：（EDTA）是一種有機(jī)化合物,，常溫常壓下為白色粉末,。它是一種能與Mg2+、Ca2+,、Mn2+,、Fe2+等二價(jià)金屬離子結(jié)合的螯合劑。動(dòng)物細(xì)胞在粘附的時(shí)候,，需要有Ca或Mg離子的參與,，EDTA與他們結(jié)合后，導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞粘附能力降低,，再加上胰蛋白酶的消化作用,，使得細(xì)胞與瓶壁快速脫離。兩者起到了協(xié)同消化的作用,。難消化的細(xì)胞,，胰酶中可填加EDTA。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重,。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA,。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心,。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,，請(qǐng)放心使用。云南胰...